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實(shí)驗(yàn)室的分析方法

2021-03-01 13:43 來(lái)源:力學(xué)實(shí)驗(yàn)室 編輯:計(jì)量檢定員

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實(shí)驗(yàn)室的分析方法
儀器校驗(yàn)
 
 
任何分析測(cè)試的目的都是為了獲得穩(wěn)定、可靠和準(zhǔn)確的數(shù)據(jù),分析方法驗(yàn)證也在其中起著極為重要的作用。方法驗(yàn)證的結(jié)果可以用于判斷分析結(jié)果的質(zhì)量、可靠性和一致性。
 
這是所有分析質(zhì)量管理體系不可分割的一部分,許多法規(guī)和質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)也要求是暗示進(jìn)行分析方法的驗(yàn)證。
 
何時(shí)進(jìn)行方法驗(yàn)證
 
在下列情況下,要求對(duì)分析方法進(jìn)行驗(yàn)證、證實(shí)計(jì)量校準(zhǔn)檢測(cè)或重新驗(yàn)證:
 
1.首次用于常規(guī)檢測(cè)前;
 
2.轉(zhuǎn)到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室時(shí);
 
3.采用《藥典》及其它法定標(biāo)準(zhǔn)未收載的檢驗(yàn)方法;
 
4.法規(guī)規(guī)定的其他需要驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法。
 
分析測(cè)量的目的是產(chǎn)生準(zhǔn)確可靠的數(shù)據(jù)。只有方法驗(yàn)證是無(wú)法保證這一目標(biāo)的實(shí)現(xiàn),但是應(yīng)當(dāng)將其作為分析測(cè)量質(zhì)量保證體系的一部分。
 
圖1揭示了影響數(shù)據(jù)質(zhì)量的不同因素
 
儀器確認(rèn)意味著儀器有確定的技術(shù)指標(biāo)、經(jīng)過(guò)檢測(cè)并證實(shí)其適用于需要驗(yàn)證的方法。
 
接著,在經(jīng)過(guò)確認(rèn)的儀器上驗(yàn)證分析方法,證明其按預(yù)期要求運(yùn)行。這個(gè)過(guò)程不依賴(lài)于任何特定的儀器。
 
如果我們希望方法能在不同廠家的儀器上使用,也應(yīng)使用那些儀器進(jìn)行方法驗(yàn)證。
 
法規(guī)和質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)要求
 
對(duì)分析實(shí)驗(yàn)室有影響的法規(guī)和質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)都要求進(jìn)行分析方法驗(yàn)證。有的法規(guī)中直接使用“驗(yàn)證”一詞,并列出特定參數(shù),也有的法規(guī)用這樣的陳述暗示驗(yàn)證要求——“檢測(cè)方法應(yīng)適合于預(yù)期用途。”驗(yàn)證要求指南出自各類(lèi)不同的機(jī)構(gòu),但驗(yàn)證目的都是為了獲得有效的分析檢測(cè)結(jié)果。這對(duì)于通過(guò)分析檢測(cè)來(lái)確保產(chǎn)品質(zhì)量和安全而言是非常重要的。
 
圖2. ICH、USP和ISO 17025中的方法驗(yàn)證參數(shù)。
 
驗(yàn)證內(nèi)容八項(xiàng)
 
準(zhǔn)確度、精密度(包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性)、專(zhuān)屬性、檢測(cè)限、定量限、線性、范圍和耐用性。
 
一、準(zhǔn)確度: 是指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度,一般以百分回收率表示。至少用9次測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。
 
二、精密度: 是指在規(guī)定的條件下,同一個(gè)均勻樣品,經(jīng)過(guò)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。
 
1、重復(fù)性:相同條件下,一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度稱(chēng)為重復(fù)性。至少9次。
 
2、中間精密度: 一個(gè)實(shí)驗(yàn)室,不同時(shí)間不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度。
 
3、重現(xiàn)性:不同實(shí)驗(yàn)室,不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。分析方法被法定標(biāo)準(zhǔn)采用應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。
 
三、專(zhuān)屬性:指在其他成分可能存在的情況下,采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性,用于復(fù)雜樣品分析時(shí)相互干擾的程度。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定方法,圴應(yīng)考察專(zhuān)屬性。
 
四、檢測(cè)限:指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的低量,無(wú)須定量。用百分?jǐn)?shù)、ppm或ppb表示。
 
五、定量限:指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的低量,測(cè)定結(jié)果應(yīng)具一定的精密度和準(zhǔn)確度。
 
六、線性:系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi),測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。
 
七、范圍:能達(dá)到一定的精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下,測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。
 
八、耐用性:指在一定的測(cè)定條件稍有變動(dòng)時(shí),測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度。
 
方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容
 
(一)準(zhǔn)確度
 
準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度,一般用回收率(%)表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測(cè)試。用于定量測(cè)定的分析方法均需做準(zhǔn)確度驗(yàn)證。
 
1.測(cè)定方法的準(zhǔn)確度
 
可用已知純度的對(duì)照品做加樣回收測(cè)定,即于已知被測(cè)成分含量的供試品中再精密加入一定量的已知純度的被測(cè)成分對(duì)照品,依法測(cè)定。用實(shí)測(cè)值與供試品中含被測(cè)成分量之差,除以加入對(duì)照品量計(jì)算回收率。
 
在加樣回收試驗(yàn)中,應(yīng)注意對(duì)照品的加入量與供試品中被測(cè)成分含有量之和必須在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍之內(nèi);應(yīng)注意加入對(duì)照品的時(shí)間(供試品預(yù)處理前);對(duì)照品的加入量要適當(dāng),過(guò)小則引起較大的相對(duì)誤差,過(guò)大則干擾成分相對(duì)減少,真實(shí)性差。
 
2.數(shù)據(jù)要求
 
在規(guī)定范圍內(nèi),取同一濃度的供試品,用6個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià);或設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度,每個(gè)濃度分別制備3份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定,用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià),一般中間濃度加入量與所取供試品含量之比控制在1:1左右。應(yīng)報(bào)告供試品取樣量、供試品中含有量、對(duì)照品加入量、測(cè)定結(jié)果和回收率(%)計(jì)算值,以及回收率(%)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%)或可信限。
 
(二) 精密度
 
精密度系指在規(guī)定的測(cè)試條件下,同一個(gè)均勻供試品,經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。
 
用于定量測(cè)定的分析方法均應(yīng)考察方法的精密度。精密度包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性。
 
1.重復(fù)性 在相同操作條件下,由一個(gè)分析人員在較短的間隔時(shí)間內(nèi)測(cè)定所得結(jié)果的精密度稱(chēng)為重復(fù)性。
 
在規(guī)定范圍內(nèi),取同一濃度的供試品,用6個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià);或設(shè)計(jì)3個(gè)不同濃度,每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液進(jìn)行測(cè)定,用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。
 
2.中間精密度
 
在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室,不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果之間的精密度,稱(chēng)為中間精密度。 為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對(duì)精密度的影響,應(yīng)進(jìn)行中間精密度試驗(yàn)。變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備等。
 
3.重現(xiàn)性
 
在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果之間的精密度,稱(chēng)為重現(xiàn)性。
 
當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí),應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。例如,建立獸藥典分析方法時(shí)應(yīng)通過(guò)不同實(shí)驗(yàn)室的復(fù)核檢驗(yàn)得出重現(xiàn)性結(jié)果,復(fù)核檢驗(yàn)的目的、過(guò)程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說(shuō)明中。應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗(yàn)用的樣品本身的質(zhì)量均勻性和貯存運(yùn)輸中的環(huán)境影響因素,以免影響重現(xiàn)性結(jié)果。
 
4.數(shù)據(jù)要求 均應(yīng)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差或可信限。
 
(三)專(zhuān)屬性
 
1.意義與要求
 
專(zhuān)屬性系指在其他成分可能存在下,采用的方法能正確測(cè)定出藥材、飲片、藥材提取物或制劑中被測(cè)成分的特性。鑒別、限量檢查、含量測(cè)定等方法均應(yīng)考察其專(zhuān)屬性。如方法不夠?qū)伲瑧?yīng)采用其他方法予以補(bǔ)充。
 
2.鑒別試驗(yàn)
 
鑒別應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分。不含被測(cè)成分的供試品,以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物,均不得干擾測(cè)定。顯微鑒別、色譜及光譜鑒別等應(yīng)附相應(yīng)的代表性圖像或圖譜。
 
3.含量測(cè)定和限量檢查
 
以不含被測(cè)成分的供試品(除去含待測(cè)成分藥材或不含待測(cè)成分的模擬復(fù)方)試驗(yàn)說(shuō)明方法的專(zhuān)屬性。色譜法和其他分析方法,應(yīng)附代表性圖譜,并標(biāo)明主成分在圖中的位置,以空白對(duì)照(除去含待測(cè)成分藥材或不含待測(cè)成分的模擬復(fù)方)試驗(yàn)說(shuō)明方法的專(zhuān)屬性。色譜法中的分離度應(yīng)符合要求,必要時(shí)可采用二極管陣列檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè),對(duì)色譜峰進(jìn)行定性檢查。
 
(四)檢測(cè)限
 
檢測(cè)限系指供試品中被測(cè)物能被檢測(cè)出的低量。確定檢測(cè)限常用的方法如下。
 
1.直觀法
 
用一系列已知濃度的供試品進(jìn)行分析,試驗(yàn)出能被可靠地檢測(cè)出的低濃度或量。 可用于非儀器分析方法,也可用于儀器分析方法。
 
2.信噪比法
 
僅適用于能顯示基線噪音的分析方法,即把已知低濃度供試品測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較,算出能被可靠地檢測(cè)出的低濃度或量。一般以信噪比為3∶1或2∶1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測(cè)限。
 
3.數(shù)據(jù)要求應(yīng)附測(cè)試圖譜,
 
說(shuō)明測(cè)試過(guò)程和檢測(cè)限結(jié)果。
 
(五)定量限 定量限系指供試品中被測(cè)成分能被定量測(cè)定的低量,其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具一定準(zhǔn)確度和精密度。用于限量檢查的定量測(cè)定的分析方法均應(yīng)確定定量限。
 
常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10∶1時(shí)相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定。
 
(六)線性
 
線性系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi),測(cè)試結(jié)果與供試品中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。
 
應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測(cè)定線性關(guān)系?捎靡毁A備液經(jīng)精密稀釋?zhuān)蚍謩e精密稱(chēng)樣,制備一系列供試品的方法進(jìn)行測(cè)定,至少制備5個(gè)濃度的供試品。以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖,觀察是否呈線性,再用小二乘法進(jìn)行線性回歸。必要時(shí),響應(yīng)信號(hào)可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換,再進(jìn)行線性回歸計(jì)算。
 
數(shù)據(jù)要求:應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。
 
(七)范圍
 
范圍系指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性,測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。 范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果及要求確定。對(duì)于有毒的、具特殊功效或藥理作用的成分,其范圍應(yīng)大于被限定含量的區(qū)間。溶出度或釋放度中的溶出量測(cè)定,范圍應(yīng)為限度的±20%。
 
(八)耐用性
 
耐用性系指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí),測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度,為使方法用于常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。開(kāi)始研究分析方法時(shí),就應(yīng)考慮其耐用性。如果測(cè)試條件要求苛刻,則應(yīng)在方法中寫(xiě)明。典型的變動(dòng)因素有:被測(cè)溶液的穩(wěn)定性,樣品提取次數(shù)、時(shí)間等。液相色譜法中典型的變動(dòng)因素有:流動(dòng)相的組成比例或pH值,不同廠牌或不同批號(hào)的同類(lèi)型色譜柱,柱溫,流速及檢測(cè)波長(zhǎng)等。氣相色譜法變動(dòng)因素有:不同廠牌或批號(hào)的色譜柱、固定相,不同類(lèi)型的擔(dān)體,柱溫,進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度等。薄層色譜的變動(dòng)因素有:不同廠牌的薄層板,點(diǎn)樣方式及薄層展開(kāi)時(shí)溫度及相對(duì)濕度的變化等。經(jīng)試驗(yàn),應(yīng)說(shuō)明小的變動(dòng)能否通過(guò)設(shè)計(jì)的系統(tǒng)適用性試驗(yàn),以確保方法有效。
 
(九)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
 
對(duì)一些儀器分析方法,在進(jìn)行方法驗(yàn)證時(shí),有必要將分析設(shè)備、電子儀器與實(shí)驗(yàn)操作、測(cè)試樣品等一起當(dāng)作完整的系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)估。系統(tǒng)適用性便是對(duì)整個(gè)系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)估的指標(biāo)。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)參數(shù)的設(shè)置需根據(jù)被驗(yàn)證方法類(lèi)型而定。
 
色譜方法對(duì)分析設(shè)備、電子儀器的依賴(lài)程度較高,因此所有色譜方法均應(yīng)進(jìn)行該指標(biāo)驗(yàn)證,并將系統(tǒng)適用性作為分析方法的組成部分。具體驗(yàn)證參數(shù)和方法參考《中國(guó)獸藥典》有關(guān)規(guī)定。
 
方法再驗(yàn)證
在某些情況下,如原藥提取工藝改變、制劑處方或工藝改變、分析方法改變等,均有必要對(duì)分析方法再次進(jìn)行全面或部分指標(biāo)的驗(yàn)證,以保證分析方法可靠,這一過(guò)程稱(chēng)為方法再驗(yàn)證。再驗(yàn)證原則:根據(jù)改變的程度進(jìn)行相應(yīng)的再驗(yàn)證。 
 
當(dāng)原藥提取工藝或制劑工藝發(fā)生改變時(shí),含量測(cè)定方法的專(zhuān)屬性就需要再進(jìn)行驗(yàn)證,以證明含量測(cè)定方法中發(fā)生的成分變化對(duì)主成份的測(cè)定無(wú)干擾。
 
當(dāng)制劑的處方組成改變、輔料變更時(shí),可能會(huì)影響鑒別的專(zhuān)屬性、溶出度和含量測(cè)定的準(zhǔn)確度,因此需要進(jìn)行輔料對(duì)鑒別、對(duì)含量測(cè)定影響的方法再驗(yàn)證。
 
當(dāng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中某一項(xiàng)目分析方法發(fā)生改變時(shí),如采用高效液相色譜法測(cè)定含量時(shí),檢測(cè)波長(zhǎng)發(fā)生改變,則需要重新提供檢測(cè)限、專(zhuān)屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性等相應(yīng)的方法學(xué)研究資料,證明修訂后分析方法的合理性、可行性。
 
驗(yàn)證報(bào)告和其他文件
 
一旦方法開(kāi)發(fā)并經(jīng)過(guò)驗(yàn)證,即應(yīng)形成驗(yàn)證報(bào)告。報(bào)告應(yīng)包含足夠的信息以使經(jīng)驗(yàn)豐富的分析人員能夠重復(fù)驗(yàn)證研究。驗(yàn)證報(bào)告通常應(yīng)包含以下內(nèi)容:
 
方法的目的和范圍(適用性、類(lèi)型)、方法簡(jiǎn)述、職責(zé)、 化合物類(lèi)型和基質(zhì)、 所有化學(xué)品、試劑、參考標(biāo)準(zhǔn)、QC樣品及其純度、級(jí)別、來(lái)源或制備的詳細(xì)要求、 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和化學(xué)品的質(zhì)量檢查程序安全預(yù)防措施、 從方法開(kāi)發(fā)實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)到常規(guī)分析的方法實(shí)施計(jì)劃和程序從耐用性試驗(yàn)得到的重要參數(shù)、 如何進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的詳細(xì)參數(shù)和條件,包括樣品制備和方法參數(shù)統(tǒng)計(jì)程序和代表性計(jì)算公式 常規(guī)分析中的QC過(guò)程,如系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 代表性圖表,如色譜圖、光譜圖和包含原始數(shù)據(jù)的校正曲線方法的接受限度和性能數(shù)據(jù)預(yù)期的測(cè)量不確定度結(jié)果重新驗(yàn)證的判斷準(zhǔn)則 方法開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證人員的資質(zhì)記錄。
 
小結(jié)
 
在規(guī)范化或質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境下運(yùn)行的實(shí)驗(yàn)室推薦采用正式方法,諸如ISO或藥典規(guī)定方法。例如,美國(guó)食品藥品和化妝品法案要求FDA監(jiān)管行業(yè)使用法定方法或證明其等效性。ISO/IEC 17025要求:“應(yīng)優(yōu)先使用以國(guó)際、區(qū)域或國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布的方法。”這些方法已經(jīng)得到驗(yàn)計(jì)量檢測(cè)檢定  證,因此,許多分析人員錯(cuò)誤地認(rèn)為這類(lèi)方法不需要在實(shí)驗(yàn)室中做任何進(jìn)一步的驗(yàn)證、證實(shí)或試驗(yàn)即可投入使用。要知道,所有檢測(cè)方法的適用性應(yīng)在實(shí)際應(yīng)用條件下得到證實(shí)。ISO/IEC 17025在5.4.2中有類(lèi)似的要求:“在引入檢測(cè)或校準(zhǔn)之前,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)證實(shí)能夠正確地運(yùn)用這些標(biāo)準(zhǔn)方法。如果標(biāo)準(zhǔn)方法發(fā)生了變化,應(yīng)重新進(jìn)行證實(shí)。
 
傳統(tǒng)的指針式電壓表和電流表都是根據(jù)一個(gè)原理就是電流的磁效應(yīng)。電流越大
 
電壓表原理
 
電壓表原理
 
所產(chǎn)生的磁力越大,表現(xiàn)出的就是電壓表上的指針的擺幅越大,電蒸汽流量計(jì)檢定 壓表內(nèi)有一個(gè)磁鐵和一個(gè)導(dǎo)線線圈,通過(guò)電流后,會(huì)使線圈產(chǎn)生磁場(chǎng),線圈通電后在磁鐵的作用下會(huì)發(fā)生偏轉(zhuǎn),這就是電流表、電壓表的表頭部分。
 
由于電壓表要與被測(cè)電阻并聯(lián),所以如果直接用靈敏電流計(jì)當(dāng)電壓表用,表中的電流過(guò)大,會(huì)燒壞電表,這時(shí)需要在電壓表的內(nèi)部電路中串聯(lián)一個(gè)很大的電阻,這樣改造后,當(dāng)電壓表再并聯(lián)在電路中時(shí),由于電阻的作用,加在電表兩端的電壓絕大部分都被這個(gè)串聯(lián)的電阻分擔(dān)了,所以通過(guò)電表的電流實(shí)際上很小,所以就可以正常使用了。
 
直流電壓表的符號(hào)要在V下加一個(gè)“_”,交流電壓表的符號(hào)要再V下加一個(gè)波浪線“~”。

本文由渦輪流量計(jì)檢定中心發(fā)表! 

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愛(ài)計(jì)量,愛(ài)生活!有計(jì)量才有產(chǎn)品,作為質(zhì)量基礎(chǔ)要素的計(jì)量為科研、生產(chǎn)服務(wù),并基于科研、生產(chǎn)的基本需求開(kāi)展工作,因此計(jì)量科學(xué)被譽(yù)為“科學(xué)發(fā)展的探測(cè)器”,在國(guó)際計(jì)量變革新時(shí)代,我們將更加重視計(jì)量,大力發(fā)展計(jì)量,深入貫徹國(guó)家關(guān)于質(zhì)量變革的決策部署,夯實(shí)計(jì)量基礎(chǔ)、創(chuàng)新計(jì)量管理、加強(qiáng)協(xié)同服務(wù)、支撐制造業(yè)高質(zhì)量發(fā)展,賦能經(jīng)濟(jì)社會(huì)發(fā)展。計(jì)量將煥發(fā)出全新的活力和動(dòng)力,迎來(lái)更加美好的明天!

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